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學術專欄

廣譽遠定坤丹的藥效物質研究最新進展

來源：日期：2022-03-04 瀏覽：7859

定坤丹始于乾隆四年（1739年），是我國治療各種婦科疾病的古代經典名方。2004年，廣譽遠定坤丹處方和工藝技術被科學技術部和國家保密局列為秘密級國家秘密技術。據(jù)了解，廣譽遠定坤丹由30味古法炮制中藥材加蜂蜜制作而成，具有滋補氣血、調經舒郁的功效，在臨床上常用于治療氣血兩虛、氣滯血瘀所致的月經不調、行經腹痛、崩漏下血、赤白帶下、血暈血脫、產后諸虛、骨蒸潮熱等。

為了進一步闡明定坤丹的藥效作用機制，海軍軍醫(yī)大學張衛(wèi)東教授團隊開展了系列針對性研究，并先后在Biomedical Chromatography雜志發(fā)表題為“Systematic characterization of the chemical constituents in vitro and prototypes in vivo of Dingkun Dan by UPLC-Q-TOF/MSE combined with the UNIFITM software”和“In vivo and in vitro metabolism study of traditional Chinese medicine formula Dingkun Dan in rats by using ultra performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry”的兩篇研究論文，揭示了定坤丹的藥效物質基礎。

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新技術鑒定出21個新成分

為了明確定坤丹全方的化學成分，研究團隊采用UPLC-Q-TOF/MSE對各樣品進行數(shù)據(jù)采集，將所得質譜數(shù)據(jù)及自建數(shù)據(jù)庫導入UNIFI?數(shù)據(jù)分析平臺，對數(shù)據(jù)進行化合物的匹配鑒定。經標準品比對，文獻查閱及質譜信息分析，最終共鑒定了定坤丹的234個化學成分（圖1），包括47個三萜皂苷類化合物，55個黃酮類化合物，38個生物堿類化合物及其他類化合物，其中63個化合物使用標準品比對確認(圖2)，6個聯(lián)苯環(huán)辛烯類成分和15個亞精胺類成分為首次在定坤丹中鑒定，并總結了皂苷類、黃酮類、生物堿類、萜類及苯丙素類化合物的裂解規(guī)律。

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（圖注：圖1. 定坤丹化學成分的BPI色譜圖（A：正離子模式，B：負離子模式））

（圖注：圖2. 定坤丹中63個對照品的化學結構圖）

體內代謝研究揭示潛在藥效成分

根據(jù)血清藥物化學理論，大鼠口服定坤丹后的入血成分才最有可能是潛在的與藥效相關的成分。隨后，研究團隊開展大鼠口服定坤丹后血漿、尿液、糞便的原型成分和代謝產物的檢測與分析。他們采用了UPLC-Q-TOF/MSE 技術對各生物樣本進行數(shù)據(jù)采集，將數(shù)據(jù)導入UNIFI?數(shù)據(jù)處理平臺，利用提取離子流方法提取定坤丹的化學成分，并結合質譜信息鑒定在體內經吸收的原型成分。利用以上技術和方法，共鑒定體內原型成分140個，其中從血漿中鑒定43個，尿液中鑒定101個，糞便中鑒定110個。同時，通過建立代謝物分析方法對可能的代謝產物進行預測，利用UNIFI?平臺進行代謝產物的篩選和匹配。本研究首次對定坤丹的體內代謝產物進行了分析，最終鑒定出代謝產物121個，其中血漿中包含93個，尿液中包含86個，糞便中包含30個。代謝反應類型主要包括羥基化反應、氧化反應、水解反應、甲基化反應、葡萄糖醛酸化反應和硫酸化反應等（圖3）。由于黃酮類化合物和苯丙素類化合物是定坤丹中代謝物最豐富的活性成分，通過體外代謝研究平臺，對五個不同類型的代表性成分甘草素、黃芩苷、芫花素、阿魏酸和藁本內酯的代謝產物進行驗證，共檢測到9個代謝物，與推測的分析結果一致。

通過對定坤丹體內外化學成分的分析與鑒定，本研究揭示了化學物質基礎及潛在的藥效成分，也有助于更好地了解定坤丹的化學成分在體內的吸收及生物轉化過程，為臨床用藥安全提供理論基礎。

（圖注：圖3. 定坤丹中各類成分可能的代謝途徑圖）

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